Memasuki 30 menit pertama, pembalap Yamaha Fabio Quartararo mengalami insiden. Dia terjatuh di tikungan keempat saat sedang mencoba meningkatkan catatan waktunya.
Di tengah situasi tersebut, pembalap Aprilia Racing Marco Bezzecchi sempat mengambil alih posisi tercepat sementara. Penampilannya cukup konsisten dan membuat dia berada di puncak catatan waktu.
Sementara itu, posisi kedua sempat ditempati pembalap Trackhouse Racing, Ai Ogura. Pembalap rookie tersebut tampil kompetitif dan mampu bersaing dengan para pembalap papan atas.
Memasuki 15 menit terakhir sesi practice, Marco Bezzecchi masih bertahan di posisi teratas. Namun tekanan terus datang dari Fabio Di Giannantonio yang mulai menemukan ritme terbaiknya.
Menjelang akhir sesi, Fabio Di Giannantonio akhirnya kembali merebut posisi pertama. Dia mencatatkan waktu 1 menit 44.808 detik yang menjadi torehan tercepat sepanjang practice MotoGP Italia 2026.
Catatan waktu tersebut bertahan hingga sesi berakhir. Tidak ada pembalap lain yang mampu melampaui torehan Fabio Di Giannantonio, sekaligus menegaskan dominasi pembalap Pertamina Enduro VR46 Racing di Mugello.