Pada 6 Juli 2002, Dhirubhai Ambani meninggal dunia setelah menderita stroke. Karena tidak meninggalkan surat wasiat, Mukesh dan Anil sempat berseteru perihal pembagian harta warisan.
Tak mau tinggal diam, ibu Mukesh dan Anil Ambani campur tangan untuk menghentikan perseteruan tersebut dan membagi perusahaan menjadi dua. Dari sanalah, Mukesh Ambani mendapatkan perusahaan Reliance Industries Limited dan Indian Petrochemicals Corporation Limited, yang kemudian disetujui oleh Pengadilan Tinggi Bombay pada Desember 2005.
Pada tahun 2010, Mukesh Ambani mulai membangun Jio Platforms, anak perusahaan RIL yang didedikasikan untuk telekomunikasi dan e-commerce. Perusahaan itu meluncurkan jaringan nasional pertama untuk layanan broadband 4G pada tahun 2016.
Dalam daftar majalah Forbes selama beberapa tahun berturut-turut, Mukesh Ambani secara konsisten memegang gelar sebagai orang terkaya di India. Ia bahkan menduduki posisi ke-10 sebagai triliuner di dunia oleh majalah Forbes 2022.
Kekayaan bersihnya yang mencapai USD44,3 miliar pada Juli 2018 membuatnya mampu melampaui Jack Ma, ketua eksekutif Grup Alibaba untuk menjadi orang terkaya di Asia. Karenanya, tak heran jika Mukesh Ambani juga masuk dalam jajaran orang paling berpengaruh di dunia.